如何防止细胞培养物污染

在体内，细胞受到高度进化和复杂的免疫系统的保护。一旦从组织中分离出来，培养中的细胞就 "自生自灭"。因此，我们必须用谨慎的无菌技术来保护它们，以防止它们被存在于我们周围，包括实验室内的微生物所污染。

存在各种类型的污染：例如，细胞可能被细菌、支原体或霉菌所污染。其中一些比其他的更难发现（如支原体），因此会在你不知不觉中对你的结果产生巨大影响。其他的会很明显，会迫使你中断你的实验--这就浪费了时间、精力和金钱。实验室里的污染对科学家来说可能是一场噩梦，特别是它们可以从一个样品扩散到存在于同一培养箱或罩子里的所有其他样品。因此，对于实验室的每个人来说，尽可能地小心谨慎是一项重要的责任，不仅是为了他们自己的实验，也是为了其他人的实验。

防止污染的措施有很多，应该在整个处理过程中应用。随着经验的积累，这些措施已成为第二天性，但仍然很容易犯不自觉的错误。虽然细胞培养领域正朝着更高的自动化水平发展2，部分原因是为了防止细胞污染，但到今天为止，我们仍然主要依靠手工劳动，这为无菌处理提供了许多犯错的机会，特别是对初学者来说。在此，我们提供一些必要的提示，以保持无菌环境，防止细胞培养污染。

1.戴手套，实验室涂层并使用引擎盖

毋庸置疑，您必须在细胞与您的实验室（或实际上您自己）之间提供障碍。 使用手套，实验室涂层和引擎盖就是这样做的。 仅在细胞培养实验室内使用实验室，并经常清洁它们。 确保经常维修引擎盖，以确保其正常工作。 请注意，有不同类型的引擎盖，具体取决于您想要的细胞和用户的保护水平。

2.正确使用引擎盖

拥有引擎盖不足以确保无菌环境：您必须正确使用它。 首先，确保您不会阻止引擎盖内的空气流：请勿将材料放在空气插座或经常在引擎盖内部长凳空间的前后发现的空气插座或入口上。 此外，请确保您在引擎盖内部工作良好，并且不太靠近边缘，以确保您实际上在无菌条件下运行。 您可能需要在一天结束时清空引擎盖，并确保在每次使用前后都用70％的乙醇或70％的IMS擦除它。 一些小组选择在引擎盖内有废物处理垃圾箱，如果这样做，将其清空并经常清洁。 其他人则宁愿不这样做，并将其放在引擎盖外面，因为在引擎盖内使用了很长时间使用材料或试剂会增加污染的风险。 最后，引擎盖通常带有紫外线光：在一天结束时打开它，以在不使用罩时对引擎盖进行消毒。

3.定期清洁孵化器和水浴

一些新的孵化器具有自我清洁能力 - 其他孵化器必须手动清洁。 经常这样做； 该协议将根据孵化器而变化。 如果您在孵化器内使用一盘水，请经常更换水。 您有时可能需要在水中添加化学物质以防止污染（始终检查该化学物质是否与托盘制成的材料兼容）。 同样，您的水浴中的水应定期更换媒体。 每次更改时，都要添加水浴处理。

4.用乙醇或IMS喷洒所有东西

乙醇通常用于杀死细菌。 确保使用70％的乙醇与水混合，而不是浓度较低。 已知水会增加乙醇在杀死细菌和一些病毒中的功效。 用乙醇喷洒您的手套和带动引擎盖的所有东西。 重要的是要意识到，每当您触摸引擎盖之外的东西时，都应该再次喷上手套，然后将其放回引擎盖中。 这适用于可能没有引起注意的自动主义，例如移动椅子，将东西扔到引擎盖外或触摸眼镜。 购买防乙醇标记来标记您的实验室，否则将乙醇喷洒在上面可以消除您的标签。

5.最大程度地减少细胞暴露于非疾病环境

由于付出了很大的努力，致力于维持孵化器和引擎盖内部的无菌环境，因此请确保您最大程度地减少了细胞在这些环境之外的时间。 例如，当您在显微镜下检查它们时，或将它们从孵化器转移到引擎盖时。 如果您必须在非紧密的条件下长时间使用细胞，例如在延时成像期间，并且需要将细胞重新放回孵化器中，请在可能的情况下为此目的指定单独的孵化器。 这样，增加的污染风险将仅限于一个孵化器。

6.购买无菌试剂并保持无菌！

确保购买无菌的试剂。 这包括媒体，PBS或任何其他将与细胞接触的产品。 如果您将试剂用于其他未无菌的作品，例如抗体，请不要将其用于细胞培养。 保留两种单独的无菌和非菌株试剂。 此外，您还可以选择通过去除细菌的膜过滤培养基（或任何其他液体试剂）。 通常，0.2μm过滤器足以阻断细菌。 维持试剂无菌性的另一种方法是将其等分。 这样，如果一个等分试样被污染了整个股票，则不受影响，您可以丢弃一个等分试样而不是整个股票。 您也可以购买预级试剂。

7.使用无菌实验室

除了试剂外，您还必须对细胞接触的实验室进行消毒。 为了对其进行消毒，您可以使用高压铲机。 但是，请确保您的实验室可以被高压灭菌！ 并非所有材料都能维持高压釜的温度。 例如，科学家经常进行高压灭绝移液器或移液器提示。 如果可以的话，购买已经无菌的消耗品，例如烧瓶。 为了保持不育，只有将烧瓶袋喷涂并将其喷涂并将其放入引擎盖中。 完成后，将袋子在引擎盖内关闭，然后再将其带回外面。 如果用胶带将袋子密封，并且胶带在引擎盖外，请用手将袋子闭合，直到胶带胶带为止。 如果您的实验室中有过滤水的来源，也可以自压水。 将压力敏感的胶带放在材料上之前，将其放在高压灭菌器中：如果材料成功地被高压灭菌和消毒，则胶带应更换颜色。

8.经常使用并更换滤芯吸头

包含过滤器的移液尖端阻止尖端内部的溶液接触移液器。 如果没有过滤尖端，您的移液可能会被污染，从而污染其首先接触的其他所有样品，这意味着，如果一个样品被微生物污染，则可以扩散到其他样品中，但这也可能意味着您可以非自愿地从一个样品中引入细胞 样本到另一个。 出于同样的原因，请确保在实验期间经常更改技巧，尤其是在样品之间。 当您使用移液器操作时，请小心，以免将 移液器吸头与其他任何东西直接接触，如果您确实更换了吸头。 重要的是，如果您想从瓶子里放东西，请避免使用必须在瓶中插入的移液器，以防止移液器直接触摸瓶子的内部：而是使用可以使用更长的移液枪 可以在瓶子内部深入的移液。

9.经常检查细胞

即使某些污染（例如与支原体相关的污染）很难在视觉上检测到，但在显微镜下定期检查细胞始终是明智的。 如果这样做，请尽量不要将细胞远离孵化器，以最大程度地减少污染风险。 您可以检查运动细菌（不要与细胞碎片混淆！），形态变化或异常增殖率。 如果您怀疑您的样品被支原体污染，则可以使用商业套件来确认这一点。

10.漂白您的污染样品

如果您确实认为样品被污染了，请在水槽中填充10％的漂白剂，三角洲或克洛斯，或者远离孵化器一段时间。 将其倒入水槽内，扔掉文化船。 如果您意识到样品被污染了，请警告您的Labmates，尤其是那些在同一孵化器中有样品的人！ 这确实很重要，它可以让他们迅速做出反应，检查样本是否正常，并相应地计划。 如果可以清空其所有样品的孵化器，请清洁孵化器。

11.使用良好的标签练习

保留细胞补充剂和媒体库存的良好记录将帮助您更快地识别污染源。 如果发现某些单元被污染，则应能够识别这些单元所属的库存并测试污染是否对整个库存是共同的。 同样，如果您知道所使用的媒体或补充剂，则可以检查或扔掉受影响的股票以避免重复污染。 良好的标签还可以防止其他细胞类型对实验污染：您想确保在测定中所拥有的单元格是您认为它们的细胞。 这是该领域的一个巨大问题，使用错误的细胞系进行了多达30,000个研究。4。 因此，请确保正确标记所有烧瓶和小瓶，以最大程度地减少样品之间交叉污染的可能性。

12.常识

最后但并非最不重要的一点是，常识可以防止污染。 例如，请勿在细胞培养实验室中使用细菌或霉菌进行工作。 不用说，不应在细胞培养孵化器中放置任何包含细菌的样品。 如果您生病了，请尽量避免继续细胞培养工作。 最小化在开放式孵化器面前或在引擎盖上工作时交谈。 不要将孵化器门打开太久。 在细胞文化处理前后，洗手！