如何优化 384 孔肝细胞培养物？

与低容量板（包括 384孔板和较小的板格式）相关的液体处理挑战必须格外小心，以防止培养过程中 iCell® 肝细胞 2.0 的过度损失。

为了最大限度地减少 384 孔 2D 培养形式中的细胞损失，我们建议您：

• 以 30,000 个细胞/孔的密度进行平板培养。每个 384 孔板的表面积约为 96孔板的三分之一。 请注意，在一个 iCell 肝细胞 2.0 冷冻管中可以使用 ≥900 万个活细胞来接种多达 300 个孔。随着时间的推移，以较低密度铺板可能会导致培养物恶化。
• 保持电镀培养基或维护培养基的培养基体积为 40 - 60 μl/孔。
• 根据我们的用户指南， 遵循 96 孔板的标准培养基更换时间表。
• 更换培养基时避免接触每个孔的底部。设置液体处理器的探头高度，使探头尖端不会接触孔底；如果手动移液，请确保移液器吸头不会接触孔底。
• 更换培养基时使用低移液速度。将液体处理器的分配速度设置为低流速，以防止细胞从孔底部分离； 如果手动移液，则将移液器吸头接触孔的一侧，然后沿着孔的一侧缓慢分配。 分配后，在离心机中旋转板，使介质到达孔底部。
• 通过去除除 20 μl 之外的所有废培养基并添加新鲜培养基以弥补体积差异来进行培养基更换。在每个孔中使用 50 μl 培养基的示例中，取出 30 μl（50 μl 减 20 μl）用过的培养基并添加 30 μl 新鲜培养基。
• 避免使用板外边缘的孔，因为它们容易出现蒸发问题，导致培养物变质，特别是培养时间超过 5 天时。我们建议仅使用内部 240 个孔来培养细胞，并仅用培养基填充外部两行和两列。
• 尽可能减少液体处理步骤。执行仅添加步骤而不清洗，以尽量减少细胞破坏，特别是对于经过化合物处理的细胞。
• 当需要清洗时，进行稀释而不是 100% 更换培养基。例如，除去除 10 - 20 μl 之外的所有培养基，添加 50 μl 洗涤液，并重复 2 - 3 次进行稀释。
• 使用预涂有 I 型胶原蛋白的组织培养板进行细胞附着。 不要手动涂抹新鲜的胶原蛋白 I 涂层。
• 将板倒置在吸水纸上并离心以倒出介质以进行不再需要无菌的终点测定。
• 使用与电镀介质和维护介质类似的 RPMI（不含补充剂）代替 PBS 进行清洗，因为 PBS 会加剧分离。