使用 PCR 板时防止错误的 5 个简单技巧

聚合酶链式反应 (PCR) 是生命科学实验室中广为人知的方法之一。

PCR 板由一流的塑料制成，可对收集的样品或结果进行出色的处理和分析。

它们具有薄而均匀的壁，可提供精确的热传递。

在为实时应用做准备时，DNA 或 RNA 的微小部分被隔离并储存在 PCR 板中。

PCR 板在热封方面非常有效，并且还限制了热量的流动。

然而，由于 PCR 板有效且可靠，在处理样品时容易出错和不准确。

因此，如果您有兴趣获得优质的PCR板。最好联系可靠的 PCR 板制造商。有了这个，您可以确保获得最优惠的价格。

以下是一些注意事项，可避免试剂或样品受到污染，并防止结果不准确。

对环境进行消毒

由于存在杂质，会出现不正确的阳性或阴性结果，这会让您怀疑结果。

杂质和污染物以各种形式出现，例如不相关的 DNA 或化学添加剂，最终会降低反应的效率和有效性。

有许多方法可以大大降低 PCR 板的污染率。

使用已灭菌的滤芯吸头是另一种防止杂质通过移液器进入样品的有用方法。

提供一套完全干净的设备，包括移液器和架子，专门用于 PCR。这将保证实验室周围的杂质或污染物转移可忽略不计。

在移液器、架子和长凳上使用漂白剂、乙醇来擦去污染物。

为所有 PCR 反应分配预留空间，以进一步减少颗粒污染。

在每一步都使用干净的手套并经常更换。

PCR 板

检查模板的浓度和纯度。

应保持使用 PCR 分析样品时使用的工作台和设备的清洁度。在分析和处理之前验证样品的纯度至关重要。

通常，分析仪会考虑 DNA 样本的浓度和纯度水平。

争取260nm/280nm的吸光度比不得小于1.8。而随后使用 230nm 和 320nm 之间的波长来识别杂质。

在一个例子中，离液盐和其他有机化合物在 230nm 的吸收率下被检测到。同时在 320nm 的吸光度下检测和验证 DNA 样品中的浊度。

避免 PCR 板与产品过载

尽管希望同时运行多个产品，但它会导致 PCR 板的交叉污染。

用不同的产品使 PCR 板超载会浪费，并且很难确定样品。

保留等分 PCR 试剂的记录

连续冷冻/解冻循环和频繁使用等分可能会通过重结晶损坏 PCR 试剂、酶和 DNTP。

在准备要分析的样品时，始终努力监控使用的等分试样的速率。

优选的 LIMS 更适合控制试剂和样品冷冻或解冻的库存和数量。

选择最佳退火温度。

选择和使用错误的退火温度是另一种方法 PCR 结果包含错误。

有时，反应并没有按计划进行。需要降低退火温度以促进成功的反应。

然而，降低温度会增加假阳性和引物二聚体出现的机会。

在使用 PCR 板时，确认熔解曲线的分析具有重要意义，因为它是选择正确退火温度的良好指标。

引物设计软件辅助设计，提供正确的退火温度，直接减少 PCR 板中的错误。

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