使用细胞培养板时常见问题解答

细胞培养板因为能给细胞实验节约时间，节约试剂材料费用，可以同时设立多个动态变量方便观察检测等，是细胞培养实验中常用和重要的耗材。但是，你能根据自身需求选择正确的培养板么？你会正确使用培养板吗？对如何处理培养板是否也有困惑？今天小编跟大家分享一下使用培养板时常见的一些问题解答！

1、96，24孔培养板或培养皿的盖子都很松，这样是方便了透气，但是细菌、霉菌等污染物会不会也随着溜进去呢?

答：（1）盖子很松，属于半开放培养，这样的目的是透气(实际上是为了使培养皿外的co2能够与培养皿充分交换，维持培养基的pH值)。

（2）有利必有弊，这样增加了污染的可能性。此外这样还会使培养皿内的液体蒸发，这对于精确定量的药物来说就显得值得注意了。所以以下二条措施是必须的：

a)培养箱内空气必须清洁(定期紫外线照，酒精擦洗，尽量少开关培养箱)

b)培养箱内的湿度必须始终保持为100%(培养箱内放置无菌蒸馏水的水槽)。注意无菌操作！

2、我的细胞接种培养板，细胞总是聚集在周边部分，该如何处理啊?我看有的战友的细胞却是聚集在中间，是不是板子的质量问题?

答： 请问你的细胞是如何混匀的?是滴管吹打还是振荡培养板?如果是后者，而且是转圈摇匀的话，很有可能由于离心力的作用使细胞甩到周边部分，导致细胞中间少，四周多！自己可以试试！

一个好办法：在你培养种板之前，把培养板放入培养箱里进行几个小时的饱和后再取出，种入细胞时力量要轻，可采取用滴头在培养板孔的侧面慢慢加入让细胞悬液流入板孔中，培养的细胞基本是均匀生长。记住千万不要用振荡器振荡，否则你的细胞就会想你说得那样聚积在一起。

3、我的细胞传代很正常，但一种到六孔板里(不管加药和对照)，总有两三个孔(随机)细胞长得不好，很小，像破碎了。有人遇到过这种情况吗?到底是啥原因呢?

答：可能跟你加液的温度有关。如果你细胞刚刚拿出来换液加液，培养基也是从4度冰箱拿出来不久，很容易细胞就会冻死了。建议你最好把培养基先在培养箱里边孵育15min先。

另外，跟你细胞的生长状态也有关。加药之前的细胞可以用高点的血清浓度培养。保证细胞状态良好。

或者放在37度水浴锅里孵育也可以，或者是培养板本身的问题，你再换换其它培养板试试看。再有可能就是细胞状态问题了，种板时的血清浓度调高试一下。

4、最近几天，我用六孔培养板接种细胞，培养24小时后更换培养基，在更换培养基之前，显微镜观察到细胞贴壁，状态非常的好，更换了培养基后，立即用显微镜观察，发现每个孔中都近乎有一半的细胞表现出近乎死亡的状态。细胞变得非常小，产生大量的碎片，而另一半的细胞一切正常，异常细胞与正常细胞之间存在一条分水岭，上半个圆是好的，下半个圆就不好，这是怎么一回事?

答：你可以看一下是不是以下这几个原因

a、培养板没放水平；

b、你的培养液如何，如果培养液过期，细胞就不会贴壁。换一点新配制的培养液试一试

c、可能是板的问题，换一个牌子的板或换用培养瓶就没问题了。

d、换培养基的时候有没有注意风机的影响，特别是所需换液的培养板很多时，容易使细胞因风吹失水而干缩破裂。如果如此，换液时应该逐个培养板进行，别怕浪费吸管，注意操作的效率!

5、把细胞消化接种到24孔板之后，已经四天了，老是每孔的中间部分长不满，每天换液时都用PBS 清洗，第二天换液时都出现同样的情况，每孔的边缘长的很好，中央大量死细胞?

答：如果细胞周围密而中间稀疏，大约有如下原因：

• 培养液加得太少。主要是由于液体张力的问题。
• 培养箱底部的水是否少了；
• 细胞接种后震荡太厉害了。由于离心力作用导致细胞分布到周围。

细胞分布均匀与否有一点很关键，即每种细胞是有个体差异的，别人的细胞操作不一定适合于你。所以要靠自己摸索，且找出专属于自己细胞的一套规律，有如下经验：

（1）所有待接种的细胞悬液在种板前一定要用吸管混匀。

（2）按资料记载，24孔板的液体量为1ml，其实1ml的量足矣。

（3）接种时，要慢慢加样，且记得轻微旋转枪头，加样不能太快，避免细胞在一个加样处聚集，且注意在不同的部位进行加样，即边加边活动枪头，人为使细胞趋于均匀分布。这样做对细胞均匀分布有一定效果。

以上问题解答你get到了吗？

关注永岳，了解更多产品资讯！

400-000-9961